РНК на вируса на хепатит С

Вирусът на хепатит С (HCV) – е РНК-съдържащи вируси от семейство Flaviviridae. Тази инфекция може да се размножава в клетките на кръвта (моноцитах, нейтрофилах, В-лимфоцитах и макрофагах), а също така засегне клетките на най-черния дроб – гепатоциты. Благодарение на висока степен на мутационной активност този тип хепатит е в състояние да се избегне излагане на имунната система на човека.

Има 11 генотипове и тегло субтипов на този вирус, които се различават по степен на поражение на черния дроб и влияят върху сроковете на лечение на хепатит. Подобно разнообразие от хепатит С, изисква различни методики за антивирусна терапия. Например, хепатит 1-ви и 4-ти генотипове трябва да се лекува 48 седмици, а за курса на терапия срещу вируси на 2-ра и 3-та вида може да се наложи само на 24 седмици.

След като експрес-тест за хепатит С е дал положителен резултат, се извършва анализ на PCR с цел откриване на РНК този на вируса в проби от кръв.

PCR-диагностика

Полимеразной верижна реакция (PCR) се нарича експериментална техника за идентифициране на вируса. Този анализ на хепатит С дава възможност значително да увеличи концентрацията на някои фрагменти от ДНК или РНК на вируса в сданных проби. Това дава възможност да ги разпознаете и дори изчисли броя.

Този тест за хепатит С, извършват по следната методика:

  1. Кръвна Проба (генетичен материал), който може да съдържа указания ген хепатит, се въвежда в епруветка. Към нея се поставят специални вещества – праймери, те представляват сегменти малка дължина на желания от гена, които синтезирани по химичен път. В този съд също се добавя към ДНК или РНК полимераза, тя е в състояние да изгради верига от нуклеиновой киселина, напълно идентични на първоначалната. За картофено състав, се добавя и селекция от свободните нуклеотиди, които са особен градивен материал за ДНК и РНК, като един от тях съдържа най-малките частици от радиоактивен фосфор.
  2. Получената смес първо се загрява до 95 градуса, в следствие на което преплетени в нормално състояние на двете спирали на ДНК се дължи на такова въздействие расплетаются.
  3. За да продължите анализ на лекарството се охлажда, в този момент праймери се прикрепят към искомому сайта на генома на вируса на хепатит, не позволява на ДНК се образува в двойна спирала. Когато става изстиване на сместа, полимераза намира точно самотен верига от нуклеотиди. По време на закрепване на този ензим, той се плъзга по веригата на ДНК (като блок по въже), а на двойната спирала той не е в състояние да «работи», за това и се извършва подгряване на сместа.
  4. За да се удължи анализ, изпълняват повторно нагряване, което отново води до разделянето на веригите на нуклеотиди. При извършването на такава цикъла на PCR в проба от броя на желаните гени хепатит се увеличава в геометрична пропорция, а останалите генетични материали продуцируются (оформени) само в линейни модели.
  5. За завършване на проучването се извършва почистване на фугите от остатъчните частици от нуклеотиди. Да ги споделят с помощта на електрофореза, при това се клон на параметрите на молекулното тегло на веригата на ДНК. Такива тестове за хепатит с с помощта на PCR позволяват да се определи, се намират търсените гените на вируса в протокола от изпитването проба или не.
READ  Генитален херпес при мъжете

Достойнство на този тест е много висок праг на чувствителност реакция PCR. Този метод за провеждане на диагностика, в идеалния вариант, се изисква само един на генома на вируса на цялата проба.

Освен това, тази PCR напълно е специфична. Във всеки от гени има уникална последователност от нуклеотиди, които, подобно отпечатък от пръст, не може никъде да се повтори. За този анализ на хепатит С праймери са синтезирани по такъв начин, че те напълно отговарят на уникални сайтове желаните гени, които няма нито една друга последователност.

Тази техника позволява и да се извърши анализ на хепатит в, с и детерминировать им помага установи окончателна диагноза.

Такъв лабораторен анализ позволява да се получи информация по-голяма, отколкото просто наличието или липсата на РНК на вируса на хепатит С или друг вид в проби от кръв. Определяне на параметъра на радиоактивно излъчване, има и възможност да се идентифицират, колко неизвестен генетичен материал първоначално е бил използван в протокола от изпитването проба. Това ви позволява да определите настройка на така наречения вирусен товар – концентрация на частиците РНК хепатит в определен размер.

Качествен анализ на PCR

Този анализ позволява да се определи фактът, че наличието на вируса на хепатит в проби от кръв. Му трябва да се извършва за всички хора, които са били открити антитела към гепатиту.

В резултат от провеждането на такива изследвания могат да бъдат само две стойности:

  • «Открито». Такъв положителен резултат от теста да се тълкува по следния начин: в разбор проба от биологичен материал, са били открити фрагменти от РНК на вируса на хепатит. От това следва, че е факт от заразяване на пациента данни вирус. Това може да е сигнал за това, че причинителят на хепатит се размножава в организма и заразява нови клетки, разрушава черния дроб.
  • «Не е открит». Този резултат говори, че в извадката, който анализировался в тази лаборатория, не са били открити фрагменти от РНК, които са специфични за вируса на хепатит C. също така Има шансове, че концентрацията на РНК на вируса, патогенът в протокола от изпитването проба, е толкова малка, че тестът не е бил в състояние да я разкрие. В такива случаи, казват, че нивото на концентрация е под прага на чувствителността анализ.
READ  Техника на вземане на намазка на трихомониаза

Такъв тест може да бъде също и ложноположительным или ложноотрицательным, дължащи се на замърсяването на биоматериала или наличието на проби, съдържащи специфични вещества, реагира с химически компоненти, необходими за извършване на анализ.

Трябва да се подчертае, че в остри фази на хепатит С качествено изследване по метода на PCR може да се откриват го на РНК след 1-2 седмици от момента на заразяване на организма. Това означава, че на откриване на заболяването могат да бъдат много преди прояви на нейните външни симптомите или поява в организма на антитела към гепатиту.

Ограда на кръв (от вена), за предпочитане изпълняват на празен стомах.

Количествен анализ на PCR

С помощта на този анализ определят нивото на концентрация на вируса на хепатит в пациента (вирусен товар). Такъв тест трябва да мине, за да се оцени броя на РНК на вируса в рамките на единица от определен обем.

Дешифрирането на тестове за хепатит с, изготвен по такъв начин, може да има следните резултати:

  • Количествен показател (в цифри)
  • Концентрацията на вируса (брой) е даден в цифрово изражение. За тази цел се използват различни показатели единици за измерване: или IU/мл (международна единица на милилитър), или копия/мл (брой копия на РНК на вируса в милилитър семенна). Средно на 1 IU/мл отговаря на 4 копия/мл, тъй като различни тест системи имат различни коефициенти превод на такива единици.

    Ниски нива на вирусния товар смятат, че стойността на този анализ по-малко на 400 000 IU/мл, а високо е количеството 8000000 IU/мл.

    Такава количествена оценка позволява да се определи нивото на инфекционности заболявания («заразность») на пациента. Колкото повече този показател за анализ, толкова по-висока е вероятността на риска от предаване на причинителя на други хора (при сексуален контакт или вертикално чрез).

  • Резултат от «по-Долу диапазон на измерване»
  • Този присъдата означава, че е количествен метод не е успял да открие РНК хепатит, но вирусът е налице в организма, само в много малка концентрация. Това бе потвърдено от извършването на допълнителен качествен анализ на PCR, и той на положителен резултат е доказателство за факта на присъствието на хепатит.

  • Резултатът е «Не е открит»
  • Тази положителна оценка, анализ говори за това, че сам по себе си е количествен тест в кръвната не успя да открие специфичен РНК на частиците на вируса на хепатит C.

Количествен анализ на PCR, която се проведе в различни дати на антивирусна терапия (1-ва, 4-та, 12-та и 24-имам седмица), позволява да се съди за ефективността на лечение и да направим необходимите корекции.

Специфика на анализ

Този тест трябва да мине, за да се определи различни генотипове на хепатит C. В момента са известни 11 генотипове на този патоген и много субтипов. В нашата страна често срещани генотипове на хепатит С от 1-ва, 2-ра и 3-та вида. В лабораториите могат да открият разнообразни субтипы тези видове: 1а, 1б, 2а, 2в, или с 3, 4, 5, 6 генотипове с различни модификации субтипов. За всички тези хепатит спецификата на определения е 100%.

Усъвършенстване на промяна генотип дава възможност да се избере подходящо лечение. Присъствието на пациента на едни или други видове генотип не е показателно от това, че болестта е по-лесно или по-трудно, те са само разновидности на вируса на хепатит б, и не повече.

В тези случаи, когато лабораторията не могат да се посочат генотипа на вируса, може да бъде издаден резултат: «Не типируется. Бяха проучени генотипове: такова нещо» (например, 1а, 2в, 3ав). Тази оценка показва, че в тази лаборатория не беше на съответните реагенти, които могат да детерминировать генотипът на вируса на хепатит. При изследването се е провело проверка за вируси, данните в списъка, но на съответствието им с образци на РНК не са били разкрити.

За да се постави окончателната диагноза, недостатъчно само един вид анализ. Всеки от тестовете може да даде ложноположительный резултат. За точно определяне на вида хепатит и степента на увреждане на организма от тази инфекция се извършва цялостно проучване. При това се прави биопсия на черния дроб и изпитване ензими: АлАТ, Ast, както и ОПИСАНИЯТ и LDH. Може да се направи и тест на билирубин и анализ на протромбинового на индекса.

Само комплекс от такива тестове и лабораторни изследвания, с цялостния анализ на състоянието на болния ще помогне да се определи наличието на хепатит в тялото, неговата форма, а също и степента на выраженности. На тяхна основа лекарят може да определи по-нататъшното лечение и да се направи възможен прогнозата за пациента.

Като продължавате да използвате сайта, приемате използването на "cookie". повече информация

The cookie settings on this website are set to "allow cookies" to give you the best browsing experience possible. If you continue to use this website without changing your cookie settings or you click "Accept" below then you are consenting to this.

Close